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食用菌液体菌种培养器菌种生产技术规程

发布时间:2014.04.16 新闻来源:镇江日泰生物工程设备有限公司 浏览次数:

日泰生物工程设备介绍食用菌液体菌种培养器菌种生产技术规程:

 使用玻璃试管和棉塞,试管18mm×180mm或20mm×200mm,棉塞要使用梳棉,不应使用脱脂棉。
  4.7.1.2 专用固体种和摇瓶液体种
  使用500ml~1000ml、耐126℃高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶。各类容器都应使用棉塞,棉塞应符合4.7.1.1规定;棉塞外要加盖4层纱布,灭菌时纱布外加盖牛皮纸防潮。
  4.7.2 液体菌种培养器培养基配方
  4.7.2.1 液体菌种培养器母种培养基
  一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)或综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基(CPDA),特殊种类需加入其生长所需特殊物质,如酵母粉、蛋白胨、麦芽汁、麦芽糖等,但不应过高,严格掌握pH值。
  固体专用种和摇瓶液体种培养基。
  4.7.2.2 固体专用种和摇瓶液体种培养基
  按4.4中培养原料的规定,根据当地原料资源和所生产品种的要求,使用适宜的培养基配方,严格掌握含水量和pH值。用水符合GB-5749生活用水标准。
  4.7.3 液体菌种培养器分装
  母种培养基的分装量掌握在试管长度的四分之一至五分之一,灭菌后摆放成的斜面顶端距试管口不少于50mm,固体专用种养基装至距瓶(袋)口不少于60mm,灭菌后不少于45mm。棉塞大小松紧要适度。培养基的松紧度要一致。摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4。
  4.7.4 灭菌
  母种和固体专用种、摇瓶液体种培养基配制分装后应立即灭菌。母种培养基灭菌0.1Mpa~0.12Mpa,30min,固体专用培养基灭菌0.12Mpa,1.5h或0.14Mpa~0.15Mpa,1h。
  装容量较大时,灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后,应自然降压,不应强制降压。母种培养基、专用种培养基,应高压灭菌,不应常压灭菌。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
  4.7.5 灭菌效果的检查
  母种培养基置于28℃恒温培养,固体专用种和摇瓶液体种培养基经无菌操作接于前面GB4789.28—2003中4.8规定的营养肉汤培养基中,于28℃恒温培养,48h后检查,并经显微镜镜检确定无微生物长出为灭菌合格。
  4.7.6 液体菌种培养器冷却
  冷却室使用前要进行清洁和除尘处理。地面铺消毒过的塑料薄膜后,将灭菌后的专用种瓶放置在冷却室中冷却到料温降至适宜温度。
  4.7.7 液体菌种培养器接种
  4.7.7.1 接种室(箱)的基本处理程序
  清洁→搬入接种物和被接种物→消毒处理。
  4.7.7.2 净化工作台的消毒处理方法
  先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒,然后开紫外灯灭菌30min。
  4.7.7.3 接种操作
  在无菌室(箱)或净化工作台上严格按无菌操作要求接种。接种完成后及时贴好标签。
  4.7.7.4 接种室(箱)后处理
  接种室每次使用后,要及时清理清洁,排除废气,清除废物,台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦拭消毒,然后开紫外灯灭菌30min。
  4.7.8 液体菌种培养器培养室处理
  在使用培养室的前两天,采用药物消毒。
  4.7.9 培养条件
  根据不同培养物的不同生长要求,给予其适宜的培养温度(多在22℃~28℃),保持空气相对湿度在65%~75%,通风,避光。摇瓶液体种置摇床上振荡培养,振荡频率随具体品种而定。
  4.7.10 培养期的检查
  各级菌种培养期间应定期检查,及时拣出不合格菌种。
  4.7.11 入库
  完成培养的母种和固体专用种及时登记入库。
  4.7.12 记录
  生产各环节应详细记录。
  4.7.13 留样
  各级菌种都应留样备查,留样的数量应以每个批号母种3支~5支,专用种5瓶~7瓶(袋),于4℃~6℃下贮存,贮存至经转接的栽培种袋(瓶)或栽培袋(瓶)至正常发菌。
  4.8 液体菌种培养器空气过滤器
  采用超高效空气过滤器。
  4.8.1 材质要求
  滤器外壳:321不锈钢制造、内表面电子抛光,外表面镜面抛光处理。
  滤芯在额定风量下,对粒径0.1~0.2μm粒子的捕集效率,在99.999%以上。空气阻力在280pa以下。所有材质应耐126℃高温。
  4.8.2 检查
  使用前要拆分检查滤芯,要求无油污、料污、无破损,外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。
  4.8.3 灭菌
  高压蒸汽灭菌121℃~123℃、灭菌40min。
  4.9 培养器检查与清洗
  4.9.1 检查
  检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好,工作正常。
  4.9.2 清洗
  对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗,达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。
  4.9.3 煮罐和空消
  培养器初次使用、出现染菌、长期放置、更换品种时,都要求煮罐和空消进行灭菌。有内置电加热棒的培养器加水至容积的80%加热至121℃,灭菌40min。用外源蒸汽灭菌的培养器,蒸汽压力达到0.105~0.125Mpa、温度121℃~124℃、40min。
  4.10 液体菌种培养基配方
  4.10.1 原材料符合NY/T528—2002标准要求。
  具体配方根据当地原料资源和生产品种的营养需求,使用适宜的配方,准确掌握加水量。用水符合GB5749—2006,生活饮用水卫生标准。
  4.10.2 起始pH值
  常见食用菌品种,培养基调节起始pH6.5~6.8。
  4.11 投料与定容
  将配制好的培养基材料,加适量温水,搅拌均匀,倒入或用泵抽入培养器中,加水定容至所需体积,培养基投料量为罐体总容积的70%~80%,然后拧紧上料口盖。
  4.12 培养器实消和培养基灭菌
  培养器内蒸汽压力达到0.105Mpa~0.125Mpa,培养基温度达到121℃~124℃、保持时间40min,防止灭菌死角。
  4.13 排料
  有内置电加热棒的培养器灭菌时,当料温达到121℃时从排料口将高温料液小流量排出,维持30min,排料量为总体积的4%左右。
  4.14 冷却降温
  灭菌结束将冷水通入培养器夹层或者内置冷却系统中循环,使培养基降温至24℃~28℃。注意降温过程中要及时向培养器内通风防止罐压回零。
  4.15 固体专用种并瓶
  选择无污染、菌丝生长正常、质量合格的固体专用种进行并瓶。并瓶应在无菌室或超净工作台内按无菌操作要求进行。
  4.16 接种
  利用火焰保护接种法,把火圈放在投料口的上方点燃,此时打开进料口盖,把并瓶后的专用种迅速投入罐中,然后,迅速把上料口盖盖好,拧紧。移走火焰圈,接种完毕。液体种进入培养阶段。
  4.17 液体菌种培养条件
  4.17.1 调节通风量
  通过进气阀和排气阀将通风量调节至1:0.5V/V~1.2V/V(料液体积/空气体积)。
  4.17.2 调节罐压
  调节罐压保持在0.02Mpa~0.04Mpa之间。
  4.17.3 培养温度
  常见品种培养温度调节在24℃~28℃范围内。少数品种根据特殊需求具体设定。
  4.17.4 培养时间
  一般品种在上述条件下培养3d~5d可达到放罐指标。经镜检等方法检验质量合格即可放罐接种。特殊品种的放罐菌龄,可根据该品种在培养器内菌丝的生长发育状态和其它理化指标变化情况具体确定。
  4.17.5 留样与检测
  4.17.5.1 留样
  ①并瓶后的菌种样品;②培养器灭菌后的空白培养基样品;③培养过程中定期从培养器中取出的样品,用作镜检和其它理化指标测定。上述样品放冰箱内保存一周以上。
  4.17.5.2 无菌检测
  对上述留存样品应在无菌检测琼脂平板上划线培养,在28℃恒温培养2d~5d,每天观察菌落生长情况,若划痕上没有细菌霉菌、酵母菌菌落生长,则表明该样品无杂菌。对留样样品③应在取样后及时镜检,确定菌丝生长发育状态和有无杂菌污染。
  4.17.5.3 pH值
  采用酸度计测定,应在规定范围之内。
  4.17.5.4 菌丝湿重
  采用Φ15cm的定量滤纸,将100ml液体菌液,过滤至无水滴滴下,称重后减去滤纸湿重。
  4.17.5.5 镜检
  采用显微镜,低倍、高倍、油镜,观察菌丝生长状况和有无杂菌污染。
本文共分 1
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